層析冷櫃是專(zhuan) 為(wei) 生化層析實驗而研製的特殊用途低溫櫃,同時也可進行其他需要低溫環境的實驗;不做實驗時則可用於(yu) 物品冷藏保存。在推出的早期,主要關(guan) 注於(yu) 功能,對其他功能則被忽略了。隨著各領域對層析櫃的需求增加,其功能也由單一功能向多功能進行發展轉變。由此給選型帶來一定難度。
一、凝膠過濾層析
凝膠過濾分子篩層析是利用有一定孔徑範圍的多孔凝膠作為(wei) 固定相,對混合物中各組分按分子大小進行分離的技術。具有分子篩作用的物質很多,如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。
二、離子交換層析
離子交換法是以具有離子交換性能的物質作固定相,利用它與(yu) 流動相中的離子能進行可逆的交換性質來分離離子型化合物的一種方法。
1、緩衝(chong) 液與(yu) pH:選擇適當的緩衝(chong) 體(ti) 係,起始濃度要盡可能低些(0.01-0.05M)緩衝(chong) 液PH值:陽離子低於(yu) pI一個(ge) pH單位以上陰離子通常高於(yu) pI一個(ge) pH單位以上。蛋白質在不同pH下保留行為(wei) 差別較大,所以許對緩衝(chong) 體(ti) 係和操作pH進行摸索,以得到較佳條件。
2、離子強度;洗脫時多采用離子濃度梯度,常加NaCl,KCl,LiCl等.在不同鹽濃度(離子強度)及其不同變化率(梯度)條件下保留行為(wei) 不同,需對該條件進行摸索。一般的,隨離子強度增加,蛋白質保留值減小。
三、疏水層析
原理:基於(yu) 生物分子表麵疏水性不同而達到分離的技術。疏水作用來自於(yu) 分子的水化結構,高濃度鹽溶液破壞生物分子的水化結構,使蛋白質內(nei) 部的疏水基團暴露於(yu) 分子外表麵,從(cong) 而可與(yu) 疏水介質結合。
蛋白質以高濃度鹽溶液結合與(yu) 柱上,以低濃度鹽溶液洗脫。生物分子表麵大都有或強或弱的疏水區域,在不同環境下,與(yu) 各種疏水介質產(chan) 生不同強弱的結合。高離子強度可加強疏水性。跟離子交換相反,高鹽吸附,低鹽洗脫;洗脫樣品又可直接或稍加稀釋後加上其他柱,作為(wei) 連接步驟的橋梁,取代鹽析沉澱技術。配體(ti) 種類繁多,很難預測哪一種、哪一個(ge) 條件適合,可用試盒選擇介質
四、親(qin) 和層析
親(qin) 和是利用待分離物質和它的特異性配體(ti) 間具有特異的親(qin) 和力,從(cong) 而達到分離目的的一類特殊層析技術。親(qin) 和層析純化過程簡單、迅速,且分離效率高。